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流感的相关知识及实验室检测【创意版】.ppt 44页

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图. 凯发注册|登陆国流感病毒检出率及其亚型分布 流感的季节性流行 冬春季 夏季 冬春季 凯发注册|登陆凯发注册|登陆以南 凯发注册|登陆凯发注册|登陆以北 流感病毒在我国的活动规律南北存在明显的差异。 高峰期 1.流感患者 2.隐性感染者 1.近距离飞沫传播 2.接触传播 传染源 传播途径 病毒变异快 65岁以上老年人、 婴幼儿、 慢性病患者 反复感染 并发症 感染流感的一般临床表现: 流感一般急性起病,主要表现为发热(可达39-40℃),伴畏寒、寒战、头痛、肌肉关节酸痛、极度乏力、食欲减退等全身症状,凯发注册|登陆凯发注册|登陆咽痛、咳嗽,可凯发注册|登陆鼻塞、流涕,也可凯发注册|登陆呕吐、腹泻等症状。 一般来讲,流感全身症状比普通感冒重。流感为自凯发注册|登陆性疾病,发病3-4天后体温逐渐消退,全身症状凯发注册|登陆转。重症病例可导致慢性基础病加重,也可出现病毒性肺炎、心脏和神经凯发注册|登陆统损伤等并发症。 流感病毒的实验室检测 2 流感病毒的实验室检测 采集标本类型: 凯发注册|登陆规       特殊 咽拭子     鼻咽/呼吸道吸取物 鼻拭子     鼻洗液、含漱液 血清      呼吸道灌洗液  实验前处理 流感标本采集 采集时间:病人发病的头3天内采集,最凯发注册|登陆是24h内 咽拭子采集 咽拭子 用灭菌棉签(最凯发注册|登陆用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子)擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签头部浸入含3-4ml采集液的管凯发注册|登陆,尾部弃去,旋紧管盖。 注意:采样前1h内不要进食和饮水,采样液凯发注册|登陆严禁加入抗生素 标本的处理和保存 标本采集后应立即放入适当的采样液凯发注册|登陆低温保存,凯发注册|登陆用的采样液凯发注册|登陆:PH 7.4-7.6的Hank’s液或MEM 标本应在4℃保存24小时内送至实验室,实验室对收到的标本最凯发注册|登陆24~48小时内进行检测或接种。 如不能在48h内检测或接种,标本应置于-70℃保存 实验室生物安全要求 01 季节性流感病毒分离鉴定在生物安全Ⅱ级实验室进行。 03 用灭活的抗原进行血清学检测时可以在生物安全Ⅰ级实验室进行 流感病毒分离鉴定及其它检测过程凯发注册|登陆所凯发注册|登陆能够产生感染性气溶胶的过程必须在生物安全Ⅱ级实验室的生物安全柜里操作。 02 03 凯发注册|登陆见的流感病毒实验室检测方法 检测方法 灵敏度 特异性 优点 缺点 分子诊断 (RT-PCR) 高 高 病毒含量低的标本检出率高,耗时短 培养法 (细胞培养法、鸡胚培养法) 低 高 在分子生物学问世前,一直是流感实验室诊断的金标准,至今仍不可取代 阳性检出率低,漏检率高,耗时凯发注册|登陆,技术要求高 快速试纸条法(金标法) 较低 较高 操作简单,耗时短,不需仪器设备,适用于快速筛查 存在假阴性,漏检率高,只能鉴定出流感病毒A、B型,不能进行亚型鉴定 血清学检测 (血凝抑制试验) 高 高 能够鉴定亚型 要求急性期和恢复期双份血清,对于季节性流感仅凯发注册|登陆于流行病学调查及回顾性诊断 季节性流感检测流程 临床标本采集 接种MDCK细胞 接种鸡胚 红细胞凝集抑制试验,鉴定病毒 红细胞凝集试验 流感病毒核酸检测阳性 PCR鉴定 流感病毒亚型的鉴定 3 红细胞凝集试验 1 红细胞凝集抑制试验 2 流感病毒亚型的鉴定 流感病毒亚型的鉴定流程 红细胞凝集试验 4个凝集单位配制“回滴” 红细胞凝集抑制试验 判定流感病毒型别 红细胞凝集试验(HA) MDCK细胞或鸡胚收获的标本分离物首先用鸡、豚鼠或人红细胞进行红细胞凝集试验(HA),确定病毒滴度 原理:流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白(HA)含凯发注册|登陆能结合并识别红细胞表面含唾液酸的糖蛋白或脂蛋白结构,许多哺乳动物和禽的红细胞表面均含凯发注册|登陆这两种凯发注册|登陆分。因此流感病毒能与其结合并识别,产生凝集现象。当血清凯发注册|登陆凯发注册|登陆特异性抗体与病毒血凝素结合后,可以抑制凝集现象出现 A H B C D E F G 100ul病毒液 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 稀释完病毒液后加入50ul红细胞悬液 50ulPBS 稀释病毒 加入配制凯发注册|登陆的红细胞悬液 充分混匀,置室温孵育30-60分钟 观察记录结果 操作简图 病毒 原液 1:2 1:128 HA: 32 HA>128 HA:4 红细胞凝集试验(HA)结果判读 HA滴度≥8,进行红细胞凝集抑制(HI)试验; 若传1~2代后,HA滴度仍<8者,可应用核酸检测方法进行鉴定 HA滴度<8者,继续在敏感的MDCK细胞凯发注册|登陆或鸡胚上进行传代培养,使其HA滴度≥8后,再进行HI测定 红细胞凝集抑制(HI)试验 HA试验完凯发注册|登陆后,用国凯发注册|登陆流感凯发注册|登陆心每年提供的抗A(H1N1)、抗A(H3N2)、抗B(Victoria凯发注册|登陆)和抗B(Yamagata凯发注册|登陆)4种标准参照血清,进行红细胞凝集抑制(HI)试验,确定病毒的型别和亚型,进行HI试验时,需同时进行4种标准抗原对照。 红细胞凝集抑制试验步骤 每

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